酶解羽毛粉的检测

一、 原理：

利用三氯乙酸作蛋白质沉淀剂，将酶解蛋白中的蛋白质和肽链较长的肽沉淀，并将

其中的短链小肽用酸溶解出来，经离心、过滤、消化、蒸馏，测定上清液中的蛋白质含

量占原样品粗蛋白含量的百分比，即发酵豆粕中酸溶蛋白含量。

二、 试剂及仪器：

1、250ml 三角瓶；

2、10ml,50ml 移液管；

3、离心机，4000r/min 以上；

4、半微量粗蛋白质测定试剂和装置；

5、15%三氯乙酸溶液（TCA 溶液）；

三、 方法：

1）准确称取样品 6.0000g 于 250ml 烧杯中，加入 15%TCA 溶液 50.00ml,混合均匀，于磁力搅拌

器上搅拌 30 分钟，静置 5min。

2）将溶液转移，4000r/min 离心 10 min，取全部上清液用干滤纸过滤。

3）准确移取上述滤液 10.00ml 于消化管中（可将消化管放到电炉子上，慢火将溶液蒸至近干，

直接加 15ml 硫酸和 6.4g 催化剂），按测定粗蛋白质的方法消化、蒸馏，测定其蛋白质含量，同

时做空白试验。

四、 结果：

酸溶蛋白含量 X ，数值以质量分数表示，按式( 1 )计算：

X =W1/W2*100

式中：

W1—处理后的上清液中的粗蛋白质含量，%；

W2—样品中总的粗蛋白质含量，%。

W1 = （V2-V1）×C×0.014×6.25 ×100 (V′/V =10ml/50ml)

m×V′/V

重复性：A）每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。2

备注：

1. 15%三氯乙酸溶液（TCA 溶液）：称取三氯乙酸 150g，定容至 1L。

2. 样品的粒度要统一：粉碎过 0.25 mm 孔径的样品筛，充分混匀。

3. 酸溶蛋白含量与温度的关系：用磁力搅拌器搅拌时，不能设置温度。室温也会对结果有影响，室温越高，检测结果越高。

4. 酸溶蛋白含量与时间的关系：搅拌完后，要马上离心，否则会使结果偏高。

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